ГистоFISH анализ перестроек гена BCL-6 на парафиновых срезах

Общая информация об исследовании

Анализ с помощью флюоресцентной in situ гибридизации (fluorescence in situ hybridization, FISH) – молекулярно?цитогенетический метод для идентификации генетических аберраций (отклонений от нормы). Изначально данный метод использовался как исследовательский для выявления наличия или отсутствия специфической ДНК последовательности в хромосомах, но благодаря прогностической и предсказательной ценности был внедрен в клиническую практику.

Метод основан на использовании флуоресцентномеченых ДНК-зондов, которые представляют собой искусственно синтезированные фрагменты ДНК (олигонуклеотиды), последовательность которых комплементарна последовательности ДНК исследуемых аберрантных хромосом. ДНК-зонды различаются по специфичности: для каждой хромосомной аномалии используются свои ДНК-зонды. Также зонды различаются по размеру: одни могут быть направлены к целой хромосоме, другие – к конкретному локусу (фрагменту хромосомы или гена).

После специальной процедуры – денатурации – молекула ДНК приобретает вид одноцепочечной нити. ДНК-зонд гибридизуется (связывается) с комплементарной ему нуклеотидной последовательностью и может быть обнаружен при помощи флуоресцентного микроскопа. Данное состояние интерпретируется как положительный результат FISH-теста. При отсутствии аберрантных хромосом несвязанные ДНК-зонды в ходе реакции "отмываются", что при исследовании с помощью флуоресцентного микроскопа определяется как отсутствие флуоресцентного сигнала (отрицательный результат FISH-теста). Метод позволяет оценить не только наличие флуоресцентного сигнала, но и его интенсивность и локализацию. Таким образом, FISH-тест – это еще и количественный метод.

FISH имеет широкие возможности в клинической онкологии для обнаружения хромосомных аномалий в опухолевых клетках. Метод позволяет исследовать генетический состав клетки, как во время митоза, так и в интерфазе. FISH имеет высокую чувствительность – позволяет обнаружить индивидуальные гены, кроме того, в одном препарате могут быть использованы несколько зондов с различными красителями.

FISH-анализ широко применяется при лимфопролиферативных заболеваниях, являясь в ряде случаев определяющим фактором для подтверждения диагноза.

Диффузная В-крупноклеточная лимфома (ДВКЛ) – самый распространенный вариант неходжкинской лимфомы (30-50 % от всех случае). Она является гетерогенной группой лимфатических опухолей с различными клиническими, морфологическими, иммунофенотипическими, цитогенетическими проявлениями. Риск развития опухоли увеличивается с возрастом и значительно выше у людей с серопозитивностью на вирус гепатита С, при наличии вируса иммунодефицита человека (ВИЧ), при аутоиммунных заболеваниях. У мужчин и женщин ДВКЛ встречается приблизительно с равной частотой.

Субстратом опухоли являются атипичные В-лимфоидные клетки, для которых характерна экспрессия как общих антигенов В-лимфоцитов, так и антигенов активированных В-лимфоцитов. В большинстве случаев опухолевые клетки располагаются диффузно, но могут быть и разбросанными среди зрелых В-лимфоцитов или формировать очаговые скопления. Очаги опухолевого роста могут располагаться как в лимфоузлах (особенно на шее и в брюшной полости), так и экстранодально (примерно в 30 % случаев) с поражением ЖКТ, яичек, костей, щитовидной и слюнных желез, кожи, головного мозга. При ДВКЛ наблюдается высокая предрасположенность к инфильтрирующему росту, что чревато прорастанием сосудов, дыхательных путей и нервов, разрушением костей. Поражение костного мозга в начале заболевания бывает лишь у 10-20 % больных. Важно своевременно выявить заболевание, так как на поздних стадиях возможны метастазы в ЦНС, печень, почки и легкие, а также тяжелое поражение костного мозга.

В патогенезе ДВКЛ наиболее изученным является механизм перестройки гена Bcl-6, который отвечает за активацию одного из механизмов апоптоза. Ген Bcl-6 расположен в локусе 3q27 и экспрессируется исключительно В-клетками зародышевого центра. В физиологических условиях ген Bcl-6 связывается с определенными регулирующими последовательностями ДНК, влияет на транскрипцию других генов, участвующих в В-клеточной активации и терминальной дифференцировке лимфоцитов. При диффузной В-крупноклеточной лимфоме происходит перестройка локуса 3q27, в результате блокируется дифференцировка В-клеток в плазматические клетки, что приводит к бесконтрольной пролиферации В-клеток зародышевого центра и формированию клона опухолевых клеток. Таким образом, исследование перестроек гена важно для диагностики диффузной В-крупноклеточной лимфомы.

Кто назначает исследование?

Гематолог, онколог.

Также рекомендуется

[02-043] Клинический анализ крови: общий анализ, лейкоцитарная формула, СОЭ (с обязательной микроскопией мазка крови)

[02-027] Ретикулоциты

[12-077] Морфологическое исследование трепанобиоптата костного мозга

[16-012] Цитогенетический анализ клеток костного мозга (кариотип)

[07-009] anti-HCV, антитела

[20-067] Иммунологическое обследование первичное

[18-124] FISH-анализ перестроек MYC гена (t(8;14)(q24;q32)t(2;8)(p11;q24)t(8 ;22)(q24;q11))

Литература

• Иммуногистохимические методы: Руководство / Ed. by George L. Kumar, Lars Rudbeck.: DAKO / Пер. с англ. под ред. Г.А.Франка и П.Г.Малькова. – М., 2011. – 224 с.
• Wan TS, Ma ES. Molecular cytogenetics: an indispensable tool for cancer diagnosis. Chang Gung Med J. 2012. Mar-Apr: 35(2): 96-110. Review. PubMed PMID: 22537925.
• Guoxian Sun, Lya Montella and Min Yang MYC Gene FISH Testing in Aggressive B-Cell Lymphomas: Atypical Rearrangements May Result in Underreporting of Positive Cases. Blood. 2012. 120:1552.
• Steven H. Swerdlow Diagnosis of ‘double hit’ diffuse large B-cell lymphoma and B-cell lymphoma, unclassifiable, with features intermediate between DLBCL and Burkitt lymphoma: when and how, FISH versus IHC. American Society of Hematology. Hematology 2014. December 5, 2014 vol. 2014 no. 1 90-99.
• М. Ж. Алексанян, Е. А. Асеева, А. И. Удовиченко, Е. В. Домрачева. Цитогенетические исследования в гематологии. Организационные аспекты. Гематология и трансфузиология, 2012, т. 57, № 4. С.23 – 27.
• Диффузная В-крупноклеточная лимфома у взрослых. Клинические рекомендации. Национальное гематологическое общество Российское профессиональное общество онкогематологов. 2016г.