Ki-маркер пролиферативной активности

Общая информация об исследовании

Одна из отличительных особенностей клеток злокачественных опухолей - способность к неограниченному делению, которое является основным фактором их биологической агрессивности. Процесс деления сопровождается появлением в клетке определенных белков, один из которых – ki-67. Он не продуцируется в клетках в состоянии покоя, что позволяет использовать его в том числе как маркер злокачественной трансформации. Исследование количества белка ki-67 в опухолевых клетках используется в диагностике и определении прогноза большинства злокачественных новообразований, в том числе его можно проводить в процессе скрининга на рак шейки матки.

Введение научно обоснованных программ скрининга позволило значительно снизить смертность от рака шейки матки, поэтому в настоящее время данный подход является одним из самых эффективных способов профилактики этого онкологического заболевания. Чаще всего скрининг включает в себя определение маркеров вируса папилломы человека (доказана связь рака шейки матки с ВПЧ-инфекцией) и цитологическое исследование. При этом диагностические возможности традиционного цитологического исследования весьма ограничены – по некоторым данным, его чувствительность составляет до 85%, он во многом лишен стандартизации, а достоверность результатов часто страдает по причине некачественного приготовления материала. В настоящее время золотым стандартом для диагностики патологии шейки матки считается метод жидкостной цитологии. Материал для исследования забирается цитощеткой, которая затем помещается в емкость со специальным консервирующим раствором. Он предотвращает преждевременное высыхание клеток, способствует сохранению их морфологических и молекулярно-биологических свойств, а также минимизирует содержание в образце постороннего материала (слизи, клеток периферической крови, элементов воспаления и разрушенных клеток). В дальнейшем с помощью специального оборудования изготавливается однослойный цитологический препарат, который врач-цитолог изучает под микроскопом. Характер патологических изменений, выявленных при цитологическом исследовании, оценивается в соответствии с общепринятой международной системой Bethesda – она представляет собой набор аббревиатур, используемых для обозначения цитологических заключений:

• NILM – Negative for Intraepithelial Lesion or Malignancy (отрицательные в отношении интраэпителиальных поражений или злокачественности – норма);

• AGC – Atypical Glandular Cells (атипичные клетки железистого эпителия);

• ASC-US - Atypical squamous cells of undetermined significance (атипичные клетки плоского эпителия неясного значения);

• ASC-H - Atypical squamous cells cannot exclude HSIL (атипичные клетки плоского эпителия, не позволяющие исключить внутриэпителиальные поражения высокой степени злокачественности);

• LSIL - Low-grade squamous intraepithelial lesion (внутриэпителиальные поражения низкой степени злокачественности);

• HSIL - High-grade squamous intraepithelial lesion (внутриэпителиальные поражения высокой степени злокачественности);

• AIS – Adenocarcinoma in situ (аденокарцинома in situ).

При выявлении по данным цитологического исследования интраэпителиальных изменений плоского эпителия низкой степени (LSIL), атипичных клеток плоского эпителия неясного значения (ASC-US) и атипичных клеток железистого эпителия (AGC) рекомендуется дополнительное обследование на содержание в атипичных клетках белка ki-67. Для анализа используется тот же материал, что и для жидкостной цитологии (однократное взятие биологического материала для исследования методом жидкостной цитологии позволяет проводить также и дополнительные диагностические исследования без повторных гинекологических манипуляций). Содержание белка ki-67 в атипичных клетках определяется с помощью иммуноцитохимического исследования. Для этого из взвеси клеток готовят мазки, которые затем окрашивают раствором антител, меченных флюоресцирующими метками, специфичными к ki-67. Если в опухолевой клетке присутствует искомый белок, антитела связываются с ним и при просмотре стекла под специальным микроскопом можно увидеть флюоресценцию, что будет свидетельствовать о положительном результате теста. Степень флюоресценции и процент клеток, в которых она есть, лежит в основе интерпретации результатов иммуноцитохимического анализа.

Что может влиять на результат?

Соблюдение правильности техники взятия биологического материала для исследования.